Qhov sib txawv tseem ceeb ntawm cov primers random thiab oligo dT yog tias cov random primer yog sib xyaw ntawm txhua qhov ua tau hexamer oligonucleotide sequences, thaum lub oligo dT primer muaj ib leeg-stranded stretch ntawm 12–18 deoxythymidines.
Rov qab hloov pauv yog ib txoj hauv kev uas cDNA tuaj yeem ua ke siv mRNA lossis txhua hom RNA. Txhawm rau tsim cDNA, thim rov qab transcriptase enzyme thiab lwm yam khoom tsim nyog yuav tsum tau muab, tshwj xeeb tshaj yog cov qauv thiab cov primers. Primers yog luv luv DNA sequences tshwj xeeb tsim los rau amplification ntawm lub hom phiaj sequences. Random primers thiab oligo dT primers yog ob hom primers siv nyob rau hauv thim rov qab. Yog li ntawd, random primer los yog oligo dT primer yog luv DNA oligonucleotide sequences yuav tsum tau rau reverse transcriptase pib rov qab transcription. Nyob ntawm tus qauv RNA, cov primer tsim nyog tuaj yeem xaiv tawm ntawm ob hom primer.
Random Primers yog dab tsi?
Random primer yog sib xyaw ntawm oligonucleotides sawv cev rau tag nrho cov hexamer sequences. Primer sequence ntawm random primer yog 5' - d (NNNNNN) -3' N=G, A, T los yog C. Yog li ntawd, random primers yuav siv tau rau amplification ntawm ib leeg-stranded DNA los yog RNA los ntawm DNA polymerase los yog rov qab transcriptase, raws. Tsis tas li ntawd, random primer sib tov muaj peev xwm nthuav tawm txhua cheeb tsam ntawm RNA los tsim cDNA. Yog li, nws tsim ntau qhov ntev ntawm cDNA.
Daim duab 01: Random Primers
tseem ceeb tshaj plaws, qhov sib xyaw ua ke ntawm primer tsis qhia cov qauv tshwj xeeb. Nws tsis muaj peev xwm paub qhov txawv ntawm mRNA thiab lwm hom RNA. Thiab, nws anneals nrog txhua hom RNA hauv cov qauv. Txawm li cas los xij, random primer sib tov yog tsim nyog rau kev thim rov qab ntawm RNAs yam tsis muaj poly(A) tails, xws li rRNA, tRNA, tsis-coding RNAs, me RNAs, prokaryotic mRNA thiab lwm yam, degraded RNA, thiab RNA nrog cov txheej txheem thib ob paub.
Oligo dT yog dab tsi?
Oligo dT primer yog qhov ncab ntawm 12 - 18 deoxythymine (dT). Cov txheej txheem primer tuaj yeem sawv cev ua 5'-d (TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3. Nws yog siv rau kev tsim cov cDNA los ntawm mRNA uas muaj poly(A) tail. Yeej, nws ua raws li tus primer rau cov tshuaj tiv thaiv catalyzed los ntawm thim rov qab transcriptase. Thaum lub sijhawm thim rov qab, oligo dT primer anneals nrog poly-adenylated tus Tsov tus tw pom ntawm 3' kawg ntawm feem ntau eukaryotic mRNAs thiab pib txheej txheem.
Daim duab 02: Rov qab Hloov Hloov Siv Oligo dT Primer
Tsis zoo li cov primer random, oligo dT primer tsis haum rau degraded RNA lossis RNA uas tsis muaj poly(A) tails, suav nrog prokaryotic RNA thiab microRNA.
Dab tsi yog qhov zoo sib xws ntawm Random Primers thiab Oligo dT?
- Random primer thiab oligo dT primer yog ob hom primers uas yog siv nyob rau hauv reverse transcription thiab ua cDNA.
- Siv cov random primer thiab oligo dT primer ua ke ua rau kom qhov rhiab heev ntawm cDNA synthesis.
- Lawv yog ib leeg-stranded luv nucleotide sequences.
Qhov txawv ntawm Random Primers thiab Oligo dT yog dab tsi?
Random primer yog luv luv oligonucleotide ib ntus tsim los ntawm ib qho kev sib tw. Lub caij no, oligo dT primer yog luv strand muaj li ntawm 12 txog 18 deoxythymidines. Yog li, qhov no yog qhov sib txawv tseem ceeb ntawm random primers thiab oligo dT. Qhov sib lawv liag ntawm random primer yog 5' - d (NNNNNN) -3' N=G, A, T los yog C. Whereas, qhov sib lawv liag ntawm oligo dT primer yog 5'-d (TTTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT)-3'. Yog li ntawd, peb tuaj yeem txiav txim siab qhov no yog lwm qhov sib txawv ntawm random primers thiab oligo dT.
Ntxiv mus, random primers tsis qhia cov qauv tshwj xeeb, thiab lawv anneal nrog txhua hom RNA, thaum oligo dT primers qhia tshwj xeeb rau poly(A) tails ntawm eukaryotic mRNA.
Cov hauv qab no infographic qhia txog qhov sib txawv ntawm random primers thiab oligo dT.
Summary – Random Primers vs Oligo dT
Random primer thiab oligo dT primer yog ob hom primers siv hauv cDNA synthesis. Random primer muaj cov sib tov ntawm oligonucleotides, sawv cev rau tag nrho cov hexamer sequences, thaum oligo dT primer yog ib leeg-stranded sequence ntawm 12 mus rau 18 deoxythymidines. Yog li, qhov no yog qhov sib txawv tseem ceeb ntawm random primers thiab oligo dT. Tsis tas li ntawd, oligo dT primers muaj txiaj ntsig zoo rau tag nrho-ntev rov qab hloov pauv ntawm RNA nrog poly (A) tail, thaum random primers muaj txiaj ntsig zoo rau kev thim rov qab ntawm ntau hom RNA, suav nrog RNA degraded, RNA uas tsis muaj poly (A) tails thiab RNA muaj. cov txheej txheem thib ob. Yog li ntawd, random primer tsis qhia template tshwj xeeb thaum oligo dT primer qhia tshwj xeeb ntawm eukaryotic mRNA uas muaj poly(A) tail.
