Qhov Tseem Ceeb Qhov txawv - Kev sojntsuam vs Primer
Kev sojntsuam molecular yog ib qho me me DNA lossis RNA ntu uas lees paub qhov sib txuas ntxiv hauv DNA lossis RNA thiab tso cai rau kev txheeb xyuas cov hom phiaj sib lawv liag. Primer yog ib qho me me ntawm DNA lossis RNA uas yog qhov chaw pib rau DNA synthesis. Primers thiab probes hybridize nrog ntxiv nucleotides ntawm tus qauv DNA lossis lub hom phiaj DNA. Txawm li cas los xij, qhov sib txawv tseem ceeb ntawm kev sojntsuam thiab primer yog cov primers tsim nyog rau DNA replication thaum sojntsuam yog qhov tsim nyog rau kev kuaj xyuas cov kab ke tshwj xeeb hauv cov qauv DNA.
Kev Tshawb Fawb yog dab tsi?
Kev sojntsuam yog ib feem me me ntawm DNA lossis RNA siv los kuaj pom lub hom phiaj DNA lossis RNA hauv cov qauv los ntawm molecular hybridization. Lawv tseem hu ua molecular markers. Qhov ntev ntawm qhov kev sojntsuam tuaj yeem sib txawv (100 txog 1000 lub hauv paus), thiab kev sojntsuam nucleotides yog ua tiav rau ib feem ntawm lub hom phiaj. Rau qhov yooj yim ntawm kev kuaj pom, cov tshuaj ntsuam xyuas tau sau nrog cov tshuaj tiv thaiv kab mob isotopes lossis nrog cov tshuaj fluorescent lossis cov tshuaj tiv thaiv. Kev sojntsuam khi nrog lub hauv paus ntxiv ntawm lub hom phiaj sib lawv liag thiab qhia pom muaj lub hom phiaj DNA lossis RNA hauv cov qauv. Muaj ob txoj hauv kev tseem ceeb ntawm kev sojntsuam cov ntawv sau npe: kawg labeling thiab nick translation. Cov tshuaj ntsuam xyuas tau muab faib ua ntau hom xws li DNA sojntsuam, RNA sojntsuam, cDNa sojntsuam thiab hluavtaws oligonucleotides probes, thiab lawv tau npaj siv ntau hom kev kawm.
Kev sojntsuam yog cov cuab yeej tseem ceeb hauv ntau qhov chaw microbial thiab molecular xws li kab mob, kev tshawb nrhiav pathology, kuaj niam txiv, DNA ntiv tes, tshawb nrhiav cov kab mob caj ces, RFLP, molecular cytogenetics, hauv situ hybridization, thiab lwm yam.
Daim duab 01: fluorescently labeled sojntsuam siv hauv FISH rau kev kuaj kab mob
Primer yog dab tsi?
Primer yog luv DNA lossis RNA fragment uas ua haujlwm ua tus pib rau DNA synthesis. DNA polymerase enzyme ntxiv nucleotides rau 3 'OH pawg ntawm primer sequence thiab synthesizes tshiab strand complementary rau tus qauv DNA. Primers yog cov tawg luv luv nrog qhov ntev ntawm 18 txog 20 nucleotides. Lawv yog cov tshuaj synthesized hauv chav kuaj rau hauv vitro DNA amplification (PCR). Primers tuaj yeem muaj cov kab ke ntawm nucleotides vim lawv tsim los ntawm cov neeg siv. Lawv raug tsim los ua kom haum nrog cov hauv paus ntxiv ntawm cov qauv DNA. Yog li, nws tuaj yeem muaj cov kab ke ntawm nucleotides. Primers yog qhov tseem ceeb tshaj plaws rau DNA replication txij li DNA polymerase tsis tuaj yeem tsim cov DNA tshiab yam tsis muaj cov DNA ua ntej. Thaum tsim cov primers rau PCR, cov hauv qab no yuav tsum tau xav txog:
- Primers yuav tsum muaj cov nucleotides ntxiv rau qhov kawg ntawm DNA uas xav kom nthuav dav.
- Primers yuav tsum muaj melting kub ntawm 55 - 65 0 C
- G thiab C cov ntsiab lus yuav tsum nyob nruab nrab ntawm 50 txog 60%.
Ob tus primers siv hauv PCR ua rau pem hauv ntej thiab thim rov qab los rov ua dua ob qho tib si ntawm cov qauv DNA. Primers feem ntau yog siv los ua PCR thiab DNA sequencing.
Daim duab 02: Primer annealing hauv PCR
Qhov txawv ntawm Probe thiab Primer yog dab tsi?
Probe vs Primer |
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| Kev sojntsuam yog ib feem me me ntawm DNA / RNA siv los kuaj pom qhov pom ntawm lub hom phiaj hauv ib qho qauv los ntawm molecular hybridization. | Primer yog ib qho me me ntawm DNA lossis RNA uas ua haujlwm pib rau DNA rov ua dua. |
| Qhov no kuaj pom muaj cov kab ke tshwj xeeb hauv cov qauv ntawm DNA lossis RNA. | Qhov no ua raws li qhov pib ntawm DNA synthesis. |
| Ntev tuaj yeem nyob hauv thaj tsam ntawm 100 - 1000 bases | Ntev yog feem ntau txog 18 - 20 bases |
| Txoj kev sib txuas ua ke | |
| Kev sojntsuam hybridizes nrog lub hauv paus ntxiv ntawm lub hom phiaj ua ntu zus | Primer anneals nrog cov hauv paus ntxiv ntawm DNA strands. |
| Labeling | |
| Kev sojntsuam tau sau npe kom yooj yim ntawm kev kuaj pom | Primers feem ntau tsis sau npe |
| Siv hauv PCR | |
| Kev sojntsuam tsis siv hauv PCR | Primers yog siv hauv PCR |
Summary – Probe vs Primer
Kev sojntsuam yog ib feem me me ntawm DNA lossis RNA ib ntus uas tuaj yeem sib xyaw nrog cov nucleotides ntxiv txhawm rau txheeb xyuas lub hom phiaj sib lawv liag hauv cov qauv. Cov tshuaj ntsuam xyuas tau sau npe radioactively, immunologically los yog fluorescently kom pom lub xub ntiag ntawm lub hom phiaj. Primer yog ib qho me me DNA lossis RNA tawg uas ua raws li qhov pib rau hauv vitro DNA amplification. DNA polymerase txheeb xyuas 3 'OH pawg primer thiab pib lub tsev ntawm cov strand tshiab ntxiv rau tus qauv. Kev sojntsuam thiab primers ua haujlwm zoo ib yam los ntawm kev sib xyaw nrog cov nucleotides ntxiv. Yog li, qhov sib txawv tseem ceeb ntawm kev sojntsuam thiab primer yog lawv cov haujlwm tseem ceeb.
